Finalizaré el bloque de la cromatografía con la cromatografía en capa fina (TLC por sus siglas en inglés, Thin Layer Chromatography). Este tipo de cromatografía difiere bastante de las dos anteriores (GC y HPLC) en lo que a configuración de equipos se refiere. Mientras que las otras dos necesitan de un equipamiento instrumental importante (inyectores, cromatógrafos, detectores...), el de ésta es mucho más sencillo (y, en consecuencia, mucho más barato).
En este caso, la fase estacionaria es una capa de un adsorbente (por ejemplo, gel de sílice o alúmina) que se mantiene sobre una lámina de aluminio o vidrio y la fase móvil (eluyente) es un disolvente o mezcla de disolventes volátil.
La forma de proceder es la siguiente:
- En un extremo de la placa se traza a lápiz una línea horizontal (a 1-2 cm del borde, aproximadamente) y se coloca a lo largo de dicha línea un poco de la muestra a analizar así como de los patrones que sean necesarios para la posterior identificación de los componentes de la muestra.
- La placa se introduce en un recipiente con el eluyente al fondo, de forma que sólo una pequeña porción de la placa quede en contacto con él, y se cierra el recipiente.
- Se deja que el eluyente suba por capilaridad sin que cubra completamente la placa. El eluyente habrá arrastrado a los distintos componentes de la muestra en función de su coeficiente de reparto (relación entre el desplazamiento de la muestra y el del disolvente).
En este vídeo se explica muy gráficamente el proceso:
Una vez hecho esto hay dos opciones: que los compuestos sean visibles a la luz natural o que no lo sean. En el primer caso no hay más problemas, puesto que a ojo se ve la separación de éstos.
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| Separación de los distintos componentes de la tinta negra. |
Para el segundo caso las placas comerciales incluyen en la fase estacionaria algún compuesto fluorescente ante la luz UV, de modo que al irradiarlos con ésta aparecen unas manchas oscuras.
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| Placa cromatográfica iluminada con luz UV. Las manchas circulares corresponden a la siembra de las muestras y las verticales a su elución. |
Os dejo este trabajo en el que se utilizó la cromatografía en capa fina (además de la espectroscopia IR) para el estudio de los barnices de una pintura de caballete.
Fuente de las imágenes e información:
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